Буфериран с фосфат физиологичен разтвор или PBS разтвор

PBS или фосфат-буфериран физиологичен разтвор е буферен разтвор това е особено ценно, тъй като имитира концентрацията на йоните, осмоларността и рН на човешките телесни течности. С други думи, той е изотоничен за човешките разтвори, така че е по-малко вероятно да причини увреждане на клетките, токсичност или нежелани валежи при биологични, медицински или биохимични изследвания.

Има няколко рецепти за приготвяне на PBS разтвор. Основният разтвор съдържа вода, натриев хидрогенфосфат и натриев хлорид. Някои препарати съдържат калиев хлорид и калиев дихидрогенфосфат. EDTA може да се добави и в клетъчен препарат, за да се предотврати струпването.

Буферираният с фосфат физиологичен разтвор не е идеален за използване в разтвори които съдържат двувалентни катиони (Fe²⁺, Zn²⁺), защото може да има валежи. Въпреки това, някои разтвори на PBS съдържат калций или магнезий. Също така, имайте предвид, че фосфатът може да инхибира ензимните реакции. Бъдете особено наясно с този потенциален недостатък, когато работите с ДНК. Въпреки че PBS е отличен за физиологичната наука, имайте предвид, че фосфатът в буферирана с PBS проба може да се утаи, ако пробата се смеси с етанол.

Типичният химичен състав на 1X PBS има крайна концентрация 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl и 2,7 mM KCl. Ето и крайната концентрация на реагентите в разтвора:

В зависимост от вашата цел можете да приготвите 1X, 5X или 10X PBS. Много хора просто купуват PBS буферни таблетки, разтварят ги в дестилирана вода и коригират рН според нуждите със солна киселина или натриев хидроксид. Лесно е обаче да направите решението от нулата. Ето рецепти за 1X и 10X фосфатно-буфериран физиологичен разтвор:

1. Разтворете реагентните соли в 800 ml дестилирана вода.
2. Регулирайте pH до желаното ниво със солна киселина. Обикновено това е 7.4 или 7.2. Използвайте pH метър, за да измерите pH, а не pH хартия или друга неточна техника.
3. Добавете дестилирана вода, за да постигнете краен обем от 1 литър.

Стерилизацията не е необходима за някои приложения, но ако сте я стерилизирате, разтворете разтвора в аликвоти и автоклавирайте за 20 минути при 1,0 psi / 1,05 kg / cm²) или използвайте филтърна стерилизация.

Буфериран с фосфат физиологичен разтвор може да бъде съхранява се при стайна температура. Може също така да бъде хладилник, но 5X и 10X разтвор може утайка при охлаждане. Ако трябва да охладите концентриран разтвор, първо го съхранявайте на стайна температура, докато сте сигурни, че солите са се разтворили напълно. Ако има валежи, затоплянето на температурата ще ги върне в разтвор. Срокът на годност на охладения разтвор е 1 месец.

10X е концентриран или основен разтвор, който може да се разрежда до получаване на 1X или нормален разтвор. 5X разтвор трябва да се разрежда 5 пъти, за да се направи нормално разреждане, докато 10X разтвор трябва да се разрежда 10 пъти.

За да приготвите 1 литров работен разтвор на 1X PBS от 10X разтвор на PBS, добавете 100 ml от 10X разтвора към 900 ml вода. Това променя само концентрацията на разтвора, а не грамът или моларното количество на реагентите. PH не трябва да се влияе.

Друг популярен буферен разтвор е фосфатният солен разтвор на Dulbecco или DPBS. DPBS, подобно на PBS, се използва за биологични изследвания и буфери в диапазона от 7,2 до 7,6. Може да се съхранява при стайна температура. Разтворът на Dulbecco съдържа по-ниска концентрация на фосфат. Това е 8,1 mM mM фосфатни йони, докато редовното PBS е 10 mM фосфат. Рецептата за 1x DPBS е:

Солите се разтварят в 800 ml вода. Регулирайте pH до 7,2 до 76, използвайки солна киселина Регулирайте крайния обем до 1000 mL с вода. Автоклавирайте при 121 ° С за 20 минути.

• Dulbecco, R.; и др. (1954). "Образуване на плака и изолиране на чисти линии с полиомиелит вируси". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Фосфатно-буфериран физиологичен разтвор (PBS." Протоколи за студено пролетно пристанище (2006). Лабораторна преса за студено пролетно пристанище.