RFLP и приложенията за ДНК анализ

Полиморфизъм с дължина на ограничения фрагмент (RFLP) е молекулен метод на генетичен анализ, който позволява на индивидите да бъдат идентифицирани въз основа на уникални модели на рестрикционен ензим рязане в специфични региони на ДНК.

Наричана още като RFLP анализ, техниката се възползва от полиморфизми в генетичните кодове на отделните хора. Въпреки че всички представители на един вид имат по същество един и същ генетичен състав, тези малки разлики отчитат различия във фенотипа, като външен вид или метаболизъм, между индивидите.

Техниката за анализ на RFLP включва изрязване на определен регион на ДНК с известна променливост, с рестрикционни ензими, след това разделяне на ДНК фрагментите чрез електрофореза от агарозен гел и определяне на броя на фрагментите и относителните размери.

Рестрикционният ензим е ензим, протеинова молекула, който разрязва ДНК на местата на рестрикция. По същество ДНК пробата се разгражда и усвоява от рестрикционните ензими. Получените фрагменти са разделени в зависимост от техните дължини и моделът на размерите на фрагментите ще се различава за всеки отделен тестван.

Пълният RFLP процес изисква маркиране на сондата, фрагментация на ДНК, електрофореза, блотиране, хибридизация, промиване и авторадиография. Откритият RFLP се визуализира с помощта на рентгенов филм в авторадиографията, където фрагментите на ДНК могат да бъдат разглеждани и анализирани, след като са разделени един от друг чрез електрофореза.

Някои от приложенията за RFLP анализ включват:

• ДНК отпечатък: Криминалистите могат да използват RFLP анализ, за ​​да идентифицират заподозрените въз основа на проби от доказателства, събрани на сцени на престъпления.
• бащинство: RFLP се използва и при определяне на бащинството или за проследяване на потекло.
• Генетично разнообразие: Техниката може да се използва при изучаване на еволюцията и миграцията на дивата природа, изучаване на моделите на размножаване в популациите на животните и откриването и диагностицирането на определени заболявания.

Техниката за използване на RFLP откриване на вариация в геномите е жизненоважно средство за картографиране на генома и анализ на генетични заболявания. Ако местоположението на определен ген на заболяването се търси в определена хромозома, изследователите биха го направили анализирайте ДНК на членове на семейство с болестта, след това потърсете подобни модели на наследяване в RFLP алели.

След локализиране на ген на заболяването, провеждането на RFLP анализ на други членове на семейството може да разкрие носител на мутиралите гени или да сигнализира за общия риск от заболяване. Важно е да се отбележи, че RFLP техниката не се използва широко сега, когато за анализ на ДНК се използват по-нови и по-здрави техники в криминалистиката и няколко други области.

За съжаление, техниката на RFLP анализ е досадна и бавна. Освен изискването на голямо количество ДНК от пробата - пробата обикновено трябва да е приблизително с размер на една четвърт, което е сравнително голям за ДНК проби - процесът, от маркирането на сондата до измиването и авторадиографията, може да отнеме до цял месец до пълна.

Резултатите от проекта за човешкия геном почти заменят нуждата от RFLP. Проектът позволи да се определи цялата последователност на ДНК, открита в човешките клетки, в човешкия геном и да се идентифицират всички гени в човешкия геном.