TAE буферът е разтвор, съставен от Tris база, оцетна киселина и EDTA (Tris-ацетат-EDTA). Той е исторически най-разпространеният буфер, използван за агарозен гел електрофореза в анализите на ДНК продукти, получени от PCR усилване, ДНК протоколи за пречистване или ДНК клониране експерименти.
Този буфер има ниска йонна сила и ниска буферна способност. Той е най-подходящ за електрофореза на големи (> 20 килобази) парчета ДНК и ще трябва да бъде заменен често или рециркулиран за по-дълги (> 4 часа) времетраене на гел. Имайки това предвид, може да искате да помислите как да направите няколко партиди от буфера.
Като се има предвид, че буферът е лесен за правене и стъпките могат да бъдат изпълнени бързо, правенето на повече от една партида наведнъж не трябва да бъде особено отнемащо време или трудно. Използвайки инструкциите по-долу, трябва да отнеме само 30 минути, за да се направи TAE буфер.
Какво ви трябва за TAE буфер
Тъй като създаването на TAE буфер изисква само бърз и прост набор от инструкции, броят на необходимите за него материали не е прекомерен. Просто ще ви трябва EDTA (етилендиаминтетраоцетна киселина) динатриева сол, Tris основа и ледена оцетна киселина.
Изработката на буфера също изисква pH метър и стандарти за калибриране, както е подходящо. Ще ви трябват също 600 милилитра и 1500 милилитра чаши или колби, както и градуирани бутилки. И накрая, ще ви е необходима дейонизирана вода, бъркалки и разбъркващи плочи.
В следващите инструкции теглото на формулата (атомната маса на всеки елемент се умножава по броя на атомите, след което масата на всеки от тях се събира заедно) се съкращава като FW.
Пригответе основен разтвор на EDTA
Разтвор на EDTA се подготвя предварително. EDTA няма да влезе напълно в разтвор, докато рН не се коригира до около 8.0. За запас от 500 милилитра разтвор на 0,5 М (моларност или концентрация) EDTA, претегля 93,05 грама динатриева сол на EDTA (FW = 372,2). Разтворете го в 400 милилитра дейонизирана вода и регулирайте рН с натриев хидроксид (NaOH). Допълнете разтвора до краен обем от 500 милилитра.
Създайте вашето запасно решение
Направете концентриран (50x) основен разтвор на TAE, като претеглите 242 грама Tris база (FW = 121.14) и го разтворите в приблизително 750 милилитра дейонизирана вода. Внимателно се добавят 57,1 милилитра ледена киселина и 100 милилитра 0,5 М EDTA (pH 8,0).
След това коригирайте разтвора до краен обем от 1 литър. Този основен разтвор може да се съхранява при стайна температура. PH на този буфер не се регулира и трябва да бъде около 8,5.
Пригответе работен разтвор на TAE буфер
Работният разтвор на 1x TAE буфер е направен чрез просто разреждане на основния разтвор с 50x в дейонизирана вода. Крайните концентрации на разтвореното вещество са 40 тМ (милимоларен) трис-ацетат и 1 тМ EDTA. Буферът вече е готов за използване при пускане на агарозен гел.
Обобщавайки
Проверете инвентара, преди да започнете да се уверите, че разполагате с всички горепосочени материали за TAE буфер. Вашият персонал за доставки трябва да може да ви каже дали имат всички необходими елементи на склад. Не искате да пропуснете нещо в средата на процедурата.