10X TBE протокол за буфер за електрофореза или рецепта

TBE и TAE се използват като буфери в молекулярната биология, предимно за електрофореза на нуклеиновите киселини. Трис буферите се използват при леко основни pH стойности, както за ДНК електрофореза, защото това задържа ДНК разтворим в разтвора и депротониран, така че ще бъде привлечен към положителния електрод и ще мигрира през a гел. EDTA е съставка в разтвора, защото това често срещано хелатиращ агент предпазва нуклеиновите киселини от разграждането чрез ензими. EDTA хелира двувалентни катиони, които са кофактори за нуклеази, които могат да замърсят пробата. Тъй като магнезиевият катион е кофактор за ДНК полимераза и рестрикционни ензими, концентрацията на EDTA се поддържа нарочно ниска (около 1 mM концентрация).

Не е необходимо да стерилизирате разтвора. Въпреки че валежите могат да се появят след период от време, основният разтвор все още е използваем. Можете да регулирате pH, като използвате pH метър и добавяте на капки концентриран солна киселина (HCl). Добре е да съхранявате TBE буфер при стайна температура, въпреки че може да искате да филтрирате основния разтвор през 0,22-микронен филтър, за да премахнете частиците, които биха подпомогнали валежите.

instagram viewer

Използването на 5X или 10X запасен разтвор случайно ще ви даде лоши резултати, тъй като ще се генерира толкова много топлина. Освен че ви дава лоша разделителна способност, пробата може да се повреди.

Въпреки че TBE и TAE са общи буфери за електрофореза, съществуват други възможности за нискомоларни проводими разтвори, включително литиево-боратен буфер и натриев боратен буфер. Проблемът с TBE и TAE е, че буферите, базирани на Tris, ограничават електрическото поле, което може да се използва при електрофореза, тъй като прекалено големият заряд причинява оттеглена температура.