TBE буфер (Tris-борат-EDTA) е буферен разтвор, съставен от Tris основа, борна киселина и EDTA (етилендиаминтетраоцетна киселина). Този буфер често се използва за електрофореза с агарозен гел при анализа на ДНК продукти, които са резултат от PCR амплификация, протоколи за пречистване на ДНК или експерименти за клониране на ДНК.
TBE Използва
TBE буферът е особено полезен за отделяне на по-малки фрагменти от ДНК (MW <1000), като малки продукти от рестрикционен ензим разградени. TBE има по-голям буферен капацитет и ще даде по-остра разделителна способност от TAE буфер. TAE (Tris-ацетат-EDTA) буфер е разтвор, съставен от Tris база, оцетна киселина и EDTA.
Обикновено TBE е по-скъп от TAE и инхибира ДНК лигазата, което може да причини проблеми, ако са предвидени последващи стъпки за пречистване и лигиране на ДНК. С трите прости стъпки, които следват, научете как да направите TBE буфер. Не трябва да отнема повече от около 30 минути, за да създадете.
От какво имаш нужда
За да направите TBE буфер, ще ви трябват само четири вещества. Останалите елементи в този списък са оборудване. Четирите необходими вещества са динатриева сол на EDTA, триена основа, борна киселина и дейонизирана вода.
Що се отнася до оборудването, ще ви е необходим рН метър и стандарти за калибриране, според случая. Освен това, ще ви бъдат необходими 600-милилитрови и 1500-милилитрови чаши или колби. Завършването на нуждите на вашето оборудване са градуирани цилиндри, бъркалки и разбъркващи плочи.
Проверете инвентара в лабораторията, която ще използвате, за да сте сигурни, че имате всичко необходимо, преди да започнете. Нищо по-лошо от това, че трябва да спрете в средата на подготовката на решение, защото сте изчерпали подходящите материали.
Ако лабораторията ви е в училище или на вашето работно място, проверете с подходящия персонал, за да проверите дали имат всички артикули на склад. Това може да ви спести време и енергия в крайна сметка.
Теглото на формулата се съкращава като FW. Това е атомното тегло на елемент, умножено по броя на атомите на всеки елемент във формула, след което се прибавят всички маси на всеки елемент заедно.
Основен разтвор на EDTA
Разтвор на EDTA трябва да се подготви предварително. EDTA няма да влезе напълно в разтвора, докато рН не се коригира до около 8.0. За 500 милилитра основен разтвор от 0,5 М EDTA се претегля 93,05 грама динатриева сол на EDTA (FW = 372,2). След това се разтваря в 400 милилитра дейонизирана вода и се регулира рН с NaOH (натриев хидроксид). След това разтворът се долива до краен обем от 500 милилитра.
Сток разтвор на TBE
Направете концентриран (5x) основен разтвор на TBE чрез претегляне на 54 грама Tris база (FW = 121.14) и 27.5 грама борна киселина (FW = 61,83) и разтварянето на двете в приблизително 900 милилитра дейонизирана вода. След това се добавят 20 милилитра от 0,5 М (моларност или концентрация) EDTA (рН 8,0) и разтворът се регулира до краен обем от 1 литър. Този разтвор може да се съхранява при стайна температура, но в по-стари разтвори се образува утайка. Съхранявайте буфера в стъклени бутилки и изхвърлете, ако се е образувала утайка.
Работно решение на TBE
За електрофореза с агарозен гел може да се използва TBE буфер с концентрация 0,5x (разреждане 1:10 на концентрирания запас). Разредете основния разтвор с 10x в дейонизирана вода. Крайните концентрации на разтвореното вещество са 45 mM трис-борат и 1 mM (милимоларен) EDTA. Буферът вече е готов за използване в пускане на агарозен гел.